檢測膠質瘤IDH1R132H的新方法

訂貨信息

德國癌癥研究中心?*授權經(jīng)銷商代理---上海起發(fā)實驗試劑有限公司提醒您不要購買所謂分裝的抗體，以免影響您的檢測，購買請認準原廠代理

文章摘要：對惡性腫瘤患者，腫瘤細胞疫苗通過激活宿主主動免疫，可以延長患者的生存期。有效的免疫應答需要腫瘤抗原在腫瘤基質中，由細胞通過組織相容性抗原（MHC）遞呈來實現(xiàn)。以往的體外試驗、動物實驗和在新鮮組織標本中已證實腫瘤抗原與抗原遞呈細胞上的MHC相互作用。但還無法應用于臨床。德國癌癥研究中心的Lukas Bunse等通過鄰位連接技術（proximity ligation assay, PLA）優(yōu)化臨床檢測過程，在膠質瘤的石蠟切片中驗證腫瘤抗原與MHCⅡ的相關性。結果發(fā)表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

【Ref: Bunse L, et al. J Clin Invest. 2015 Feb;125(2):593-606. doi: 10.1172/JCI77780. Epub 2015 Jan 2.】

對惡性腫瘤患者，腫瘤細胞疫苗通過激活宿主主動免疫，可以延長患者的生存期。有效的免疫應答需要腫瘤抗原在腫瘤基質中，由細胞通過組織相容性抗原（MHC）遞呈來實現(xiàn)。以往的體外試驗、動物實驗和在新鮮組織標本中已證實腫瘤抗原與抗原遞呈細胞上的MHC相互作用。但還無法應用于臨床。德國癌癥研究中心的Lukas Bunse等通過鄰位連接技術（proximity ligation assay, PLA）優(yōu)化臨床檢測過程，在膠質瘤的石蠟切片中驗證腫瘤抗原與MHCⅡ的相關性。結果發(fā)表在2015年2月的《The Journal of Clinical Investigation》上。

PLA是一種高靈敏度蛋白質檢測新技術，通過一對核酸適體探針識別目標蛋白分子。當目標蛋白相互作用時，它們在空間位置上相互接近，并與特異核酸鏈連接，并經(jīng)PCR反應擴增特異核酸鏈，來實現(xiàn)對相互作用的目標蛋白分子檢測、定位和定量。

該研究結果顯示，通過PLA方法可以原位檢測膠質瘤內(nèi)MHCⅡ分子和突變型異檸檬酸脫氫酶1（IDH1R132H）蛋白的相互作用，確定這些蛋白的免疫抗原性和抗原表位。作者認為該檢測技術能用于獲得在膠質瘤組織中是否存在特異性抗原的必要信息，有助于指導臨床上對具有特異性抗原膠質瘤的免疫治療。

圖1. A圖示突變型IDH1R132H單克隆抗體（H09）在彌漫性星形細胞瘤上的免疫組化染色；B圖示IDH1蛋白包含第132位氨基酸的15肽和20肽；C圖示B中多肽與H09的ELISA結果，p122-136、p124-138、p123-142、p126-140的免疫原性zui強；D和E圖示IDH1R132H多肽與MHC II復合物可以*抑制游離IDH1R132H與H09的ELISA結果。

圖2. A圖為抗HLA-DR和H09進行PLA的示意圖，其中紅圈表示PCR擴增循環(huán)，α和β為HLA-DR鏈，pIDH為IDH1抗原表位多肽。B圖為膠質瘤細胞株LN229的流式和免疫熒光結果。C圖為IDH1及其突變型的生化反應，后者特征性產(chǎn)生2HG。D圖為野生型IDH1、突變型IDH1R132H和IDH1D252G基因代謝產(chǎn)物2HG的濃度。E和F圖為LN229過度表達突變型IDH1的Western blot和免疫熒光結果。

圖3. A圖通過PLA技術可以看到IDH1R132H和HLA-DR在IDH1R132H過表達的LN229細胞株中存在共定位（colocalization）。B圖通過RNA干擾抑制HLA-DR表達可以消除這種共定位現(xiàn)象。C圖通過流式試驗證實RNA干擾可以顯著降低HLA-DR表達。D圖示IDH1R132H和HLA-DR的PLA（紅色）和IDH1R132H染色（綠色）。E圖示IDH1R132H和HLA-DR的PLA和IDH1R132H表達在過度表達IDH1R132H的LN229細胞中的相關性。

圖4. A圖示NCH620細胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA、IDH1R132H的IHC和HLA-DR的IHC。B圖和C圖分別示膠質瘤細胞株NPH001和NCH645的IDH1R132H-HLA-DR的PLA。D圖示NCH620細胞株的IDH1R132H-HLA-DR的PLA和HLA-DR的熒光共標。

（感謝 ：復旦大學附屬華山醫(yī)院小卡西烏斯編譯，復旦大學附屬華山醫(yī)院陳靈朝博士審校，復旦大學附屬華山醫(yī)院陳銜城教授終審）