類風濕性關節炎動物模型CIA建立

（一）佐劑性關節炎(AA)的動物模型

1.模型概述： 此模型是細菌學家Freund于50年代創立，又稱福氏佐劑關節炎，福氏佐劑分為*佐劑(CFA)和不*佐劑(IFA)。福氏佐劑是將液體石蠟與無水羊毛脂按2：1或6：4比例混合的混合液1ml，高壓滅菌，加入8O℃ 滅活1h的減毒卡介苗或干燥結核菌10 mg制成。不加卡介苗的為不*佐劑。

2.模型制備：造模多采用大鼠，足跖部皮下注射法：將液體石蠟高壓滅菌，BCG 80℃ 滅活1h，把BCG加入液體石蠟配成10 g•L－1的乳劑，充分碾磨、混勻，即得CFA，于大鼠左后足跖皮內注射CFA 01ml致炎［1515］。原發病變主要表現為致炎局部的炎癥反應，續發病變一般于致炎后10～20天左右出現，20天左右達到高峰，病理改變為滑膜下組織炎癥，滑膜增生，血管翳形成。軟骨破壞。4周后，關節紅腫減退，骨質減少，新骨形成，關節間隙變窄。形成不可逆的關節改變。

（二） Ⅱ 型膠原誘導的關節炎(CIA)模型

1.模型概述：CIA模型是Trentham等1977建立的實驗性關節炎動物模型，20世紀80年代至90年代初期，國外大量重復實驗并在臨床表現、病理組織學和免疫學等方面進行了廣泛深入的研究。雞、小牛、大鼠的Ⅱ型膠原(CⅡ)均能引起關節炎。選擇的動物一般為嚙齒類和靈長類。CⅡ大量存在于關節軟骨中，同時也存在于視網膜和玻璃體中，CⅡ是一種與免疫系統隔絕的蛋白質，但在某些病理條件下可作為一種自身抗原呈現出來。Trenthem發現50％的RA患者血清中存在有抗CⅡ的自身抗體，這表明CⅡ可誘導體內產生關節炎性質的自身免疫反應。根據這些理論人們用CⅡ免疫大鼠或小鼠，從而成功地建立了ClA模型。

      以Ⅱ型膠原免疫所致動物有兩個要素，一是保持Ⅱ型膠原的自然狀態，即完整的三股螺旋，另外就是有佐劑的參與。Ⅱ型膠原可以是同種的，也可以是異種的。Ⅱ型膠原免疫誘發關節炎的產生和發展都依賴于自身T 細胞和B細胞的激活。去除T 細胞或去除B細胞，動物都不能用Ⅱ型膠原免疫誘發關節炎病變。

2.模型制備：Ⅱ型膠原誘導的關節炎模型是DE Trentham 等于1977年創立的，將純化的天然膠原溶于0.1M 的醋酸制成濃度1mg／ml的溶液，與等量的福氏佐劑或不*佐劑混合成穩定的乳劑。用1ml乳劑分4～6個部位注射大鼠背部皮內，注射部位會出現小潰瘍(在7～1O天后自愈)，21天后，可將0．5mg膠原溶于0．5ml 1M 的醋酸中注入大鼠腹腔再次免疫。初次注射后14～60天后，出現關節紅腫，通常發生于關節遠端，后足踝關節是zui常累的部位。CIA 急性期病理改變可分為兩期，免疫1O天后，關節內只有一些纖維沉積物而滑膜細胞無改變，12天后，肉眼可見踝關節紅腫，2O％ 的膝關節出現紅腫．光鏡下滑膜細胞增多．層數增至3～7層，并向軟骨骨面爬行，滑膜及滑膜下組織有纖維沉積。電鏡下則見滑膜細胞變圓。細胞間接觸減少，絲狀偽足增多．細胞內溶酶體和內質網增大、增多。19天后進入第二期。增生滑膜由6～10μm 增厚至200～250μm，形成血管翳，其中有大量單核細胞、多形核巨細胞、巨噬細胞，在微血管周圍形成微膿腫，可見到單核細胞侵入軟骨連接處的軟組織。6～7周后，炎癥進入慢性期，水腫仍存在，浸潤的細胞以CD 的T 細胞為主，關節內出現瘢痕，顆粒狀增生組織，軟骨及軟骨下骨被破壞，zui后(6個月)，導致關節強直。

（三）卵蛋白誘導性動物模型

模型制備：雞卵蛋白溶液(20mg／ml)、卡介苗和福氏不*佐劑(三者比例lml：2ml：lm1)混合在1500r／min勻漿器下制成混合乳劑。將混合乳劑1ml在兔肩胛間區分5個部位皮下注射，2周及4周分別加強免疫1次，然后雙膝關節腔內各注射5mg卵蛋白。病理學觀察發現，在雙膝注射卵蛋白后第1天關節直徑和表面溫度大幅度上升．以后緩慢下降，至14～21天后達到平臺期。鏡下可觀察到滑膜細胞明顯增生，排列紊亂并有WBC 浸潤，淋巴細胞大量增生，纖維組織亦增生，部分軟骨缺損。其免疫過程大致為，在致敏兔關節腔內注射一定量抗原后，產生的免疫復合物沉積在關節滑膜上，注射后數小時，滑膜上大量多核細胞浸潤。然后誘導細胞介導的免疫反應，引起大量單核細胞浸潤，從而形成慢性滑膜炎、滑膜增生，淋巴細胞生發中心形成針對免疫抗原的*性抗體。隨后，關節軟骨上生成血管翳，侵蝕骨和軟骨，其病理過程類似RA。

（四）PIA

      PIA是以體液免疫和細胞免疫異常為特征的血清陽性的實驗性關節炎，是由CD4 T細胞介導，Pristante使多克隆T細胞擴增，進一步引起淋巴結變，浸潤滑膜。因此選擇性T細胞浸潤炎癥性關節是PIA易感性的重要因素。

（五）DIA

     由DDA誘導的關節炎大鼠也是研究關節炎的動物模型。當皮下注射2 mg溶于PBS的DDA時，可以在Lewis和DA大鼠中誘導多關節炎，但發病率低，病情嚴重程度較輕；而注射2 mg混合非*弗氏佐劑的DDA，能誘導嚴重多關節炎，Lewis大鼠發病率為100％。DIA組織學表現為關節部位細胞浸潤，滑膜充血，肉芽組織增生，軟骨破壞和骨質變形。用DIA大鼠淋巴細胞能成功轉移同系鼠發生多關節炎。

（六）ACII

     為佐劑角又菜膠誘導的關節炎動物模型，其誘導的方法是：以小鼠為例，在實驗條件下。選擇有效、敏感小鼠，先在皮下注射CFA，隨后在不同時間，于足跖皮下注射角叉菜膠。實驗表明，大鼠與小鼠之間對免疫誘導的應答不同，在DAB／1小鼠表現為足爪及踝關節的腫脹，于注射角叉菜21d后更明顯，不依賴于應用炎性劑的特點，其組織病理變化與大鼠相似，都有皮下充血、淋巴細胞浸潤及肉芽腫的形成。ACⅡ模型主要用于炎**物的篩選等。

虎 克自身免疫性疾病實驗動物模型

    Hookelabs是的自身免疫性疾病實驗動物模型及其相關產品研發和生產企業，其創始人Suzana Marusic博士曾在惠氏制藥長期擔任炎性靶點驗證實驗室的主管，負責哮喘和自身免疫性疾病的研究，研發制備出高度相似性的哮喘和實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型，并以此驗證了多個藥物靶點。Suzana Marusic憑借其多年來在T細胞分離培養、細胞免疫、外周耐受機制及免疫相關疾病和腫瘤研究的豐富經驗，創立了虎克實驗動物模型公司，致力于為科研和藥物研發提供的自身免疫性實驗動物模型建立試劑盒，以及相關的實驗動物組織和血清。公司目前的實驗動物模型主要包括膠原誘導的關節炎模型、實驗性自身免疫性腦脊髓炎模型、系統紅斑狼瘡、炎性腸病等模型的制備試劑盒，以及多種免疫狀態下動物組織和血清樣本。虎克實驗動物模型提供的模型制備試劑盒以預充免疫原的注射器為主，操作簡單，結果可靠，可重復性高。

上海起發實驗試劑有限公司專業從事生命科學研究領域產品代理及部分生物產品自主研發，以為科研人員提供高品質科研產品為己任，是您值得信賴的科研伙伴！
     

一、膠原誘導的類風濕關節炎模型CIA

類風濕關節炎Rheumatoid arthritis (RA)是一種常見的自體免疫性疾病，多見于關節部位，但在心臟結締組織、血管、肺、眼皮膚及腎臟均有發現。RA發病中女性多余男性（約2：1），其癥狀包括疼痛、腫脹感和僵硬、粘連、關節面糜爛、骨吸收關節變形甚至失去功能。

虎克實驗室在RA實驗動物模型的建立上有著豐富的經驗，其核心動物模型膠原蛋白誘導的類風濕關節炎模型（CIA）即是常用的類風濕關節炎模型，該模型常用DBA/1小鼠建立，但是也可用B10.R111 小鼠, B10.Q 小鼠及Lewis 大鼠建立。

1、虎克公司提供的CIA模型誘導試劑盒

四種試劑盒區別在使用不同來源的膠原蛋白誘導，斜線后為相應的免疫佐劑。

2、CIA免疫流程

3、CIA模型評價指標

虎克公司其他產品LIST