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        Enzymatics L6020L 說明書

        更新時間:2018-04-11      點擊次數:3028

         

        貨號:L6020L

        品名:T7 DNA Ligase(T7 DNA連接酶)

        產品描述:

        T7 DNA連接酶催化雙鏈DNA中5'磷酸和3'羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。該酶將加入平端和粘性末端以及修復雙鏈DNA中的單鏈缺口。

         

        規格:

        900,000 U

        濃度

        3,000,000 U/ml

        保存

        -25°C至-15°C

        純度(SDS-PAGE)

        > 99%

        活性:

        3,000,000 U/mg

        SS核酸外切酶

        30,000 U <1.0% released

        DS核酸外切酶

        30,000 U <1.0% released

        DS內切核酸酶

        30,000 U = No conversion

        大腸桿菌 DNA污染

        30,000 U <10 copies

        其他

        1.在沒有高濃度擁擠劑(例如20-30%PEG 6-8000)的情況下,T7 DNA連接酶的特異性活性在平末端片段上減少1000倍(1,2)。

        2.T7 DNA連接酶不能連接單鏈DNA的片段(1)。

         

        蛋白質來源

        攜帶T7 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。

         

        提供

        20mM Tris-HCl 
        50mM NaCl 
        1mM DTT 
        0.1mM EDTA 
        50%甘油
        pH 7.5在25℃

         

        隨附:

         

        B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)

        2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
        132mM Tris-HCI
        20 mM MgCl2
        2 mM DTT
        2 mM ATP
        15% PEG 6000
        pH 7.6 @ 25°C

         

        單位定義 
        1單位定義為在23℃30分鐘內連接50ng 100ng DNA的片段與粘性末端所需的T7 DNA連接酶的量。

         

        質量控制分析

         

        單位表征測定
        單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X快速連接緩沖液中進行酶稀釋,并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X快速連接緩沖液的反應中。將反應在?23℃(室溫)孵育30分鐘,在冰上沉降,并在用溴化乙錠染色的1%瓊脂糖凝膠上分析。

         

        蛋白質濃度(OD 280)測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品(Pierce Cat#23209)標準化的Nanodrop ND-1000分光光度計
        在OD 280處分析2.0μL酶樣品并用產品儲存溶液沖切。觀察到的3個重復樣品的平均測量值使用67,850的消光系數和41,132道爾頓的分子量轉換為mg / mL。

         

        SDS-Page(物理純度評估)

        將2.0μL濃縮的酶溶液加載到變性的4-20%Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上,該凝膠側翼為寬范圍的MW標記和2.0μL的樣品的1:100稀釋物。電泳后,將凝膠染色并比較??樣品以確定物理純度。該測試的驗收標準要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質條帶的質量,確認濃縮樣品的純度大于99%。

         

        污染測試

        單鏈核酸外切酶活性
        將含有10,000cpm放射性標記的單鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應物在37℃下溫育4小時,導致TCA可溶性計數的釋放小于1.0%。

         

        雙鏈切核酸酶活性將含有5,000cpm放射性標記的雙鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應物在37℃下溫育4小時,導致TCA可溶性計數的釋放小于1.0%。


        雙鏈核酸內切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和10μL酶溶液的50μL反應物在37℃下溫育4小時,結果通過瓊脂糖凝膠電泳確定沒有肉眼可察覺地轉化為帶切口的環狀DNA。

         

        大腸桿菌  16S rDNA污染測試
        復制酶溶液的5uL樣品變性,并在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA,使用對應于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。測試的驗收標準是由3個重復的無模板對照樣品的平均值產生的閾值循環計數(C t)。基于無模板對照 Ct  值與標準曲線數據之間的相關性,該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。

         

         

         

        部分產品信息:

        貨號

        品名

        規格

        濃度

        品牌

        N2070-10-L

         ATP Solution 

        50 µmol

        10 mM

        Enzymatics

        N2050-10-L

        10 mM dNTP Solution Mix

        100 µmol

        10 mM

        Enzymatics

        N2010L

        100 mM 75µmol dNTP Solution Set 

        75 µmol

        100 mM

        Enzymatics

        N2010-A-L

        100 mM dATP Solution 

        75 µmol

        100 mM

        Enzymatics

        N2050L

        100µmol dNTP Solution Mix 

        100 µmol

        25 mM

        Enzymatics

        Y9180L

        10x Uracil Cleavage System 

        750 Reactions

        N/A

        Enzymatics

        P7670

        2x HiFi PCR Master Mix 

        1 rxn

        2x

        Enzymatics

        Y9420L

        5x ER/A-Tailing Enzyme Mix 

        24 reactions

        N/A

        Enzymatics

        Y9380L

        E. coli Pyrophosphatase 

        50 U

        100 U/mL

        Enzymatics

        Y9030L

        E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein 

        1.5 mg

        2.75 mg/ml

        Enzymatics

        Y9140-HC-L

        End-Repair Mix (High Concentration) 

        75 Reactions

        1 Rxn/µL

        Enzymatics

        Y9140-LC-L

        End-Repair Mix (Low Concentration) 

        200 Reactions

        1 Rxn/µL

        Enzymatics

        Y9080L

        Endonuclease VIII 

        10,000 U

        10,000 U/ml

        Enzymatics

        P7600L

        EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) 

        10,000 U

        200,000 U/mL

        Enzymatics

        X8010L

        Exonuclease I 

        30,000 U

        20,000 U/ml

        Enzymatics

        X8020L

        Exonuclease III 

        50,000 U

        100,000 U/ml

        Enzymatics

        P7010-HC-L

        Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) 

        10,000 U

        50,000 U/ml

        Enzymatics

        P7010-LC-L

        Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) 

        10,000 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        P7060L

        Klenow Fragment 

        2,500 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        X8030L

        Lambda Exonuclease 

        10,000 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        P7040L

        M-MuLV Reverse Transcriptase 

        100,000 U

        200,000 U/ml

        Enzymatics

        P7090L

        Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) 

        3,000 U

        30,000 U/ml

        Enzymatics

        P7140-HC-L

        Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) 

        100,000 U

        400,000 U/ml

        Enzymatics

        P7140-LC-L

        Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) 

        100,000 U

        40,000 U/ml

        Enzymatics

        P7610L

        NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions 

        250 Reactions

        2X

        Enzymatics

        P7590L

        Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase 

        500 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        P7460L

        Poly(A) Polymerase 

        1,000 U

        5,000 U/mL

        Enzymatics

        Y9260L

        RecA 

        1.5 mg

        2.0 mg/mL

        Enzymatics

        Y9220L

        RNAse H 

        5,000 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        Y9240L

        RNAse Inhibitor 

        20,000 U

        40,000 U/ml

        Enzymatics

        L6010L

        T3 DNA Ligase 

        900,000 U

        3,000,000 U/ml

        Enzymatics

        L6030-LC-L

        T4 DNA Ligase 

        150,000 U

        120,000 U/ml

        Enzymatics

        L6030-HC-L

        T4 DNA Ligase (Rapid) 

        240,000 U

        600,000 U/ml

        Enzymatics

        P7080L

        T4 DNA Polymerase 

        2,000 U

        3,000 U/ml

        Enzymatics

        Y9130L

        T4 Gene 32 Protein 

        1.0 mg

        10 mg/mL

        Enzymatics

        Y9040L

        T4 Polynucleotide Kinase 

        10,000 U

        10,000 U/ml

        Enzymatics

        L6050L

        T4 RNA Ligase 1 

        10,000 U

        20,000 U/ml

        Enzymatics

        L6080L

        T4 RNA Ligase 2 

        4,500 U

        30,000 U/ml

        Enzymatics

        L6070L

        T4 RNA Ligase 2 Truncated 

        500 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        L6020L

        T7 DNA Ligase 

        900,000 U

        3,000,000 U/ml

        Enzymatics

        P7260L

        T7 DNA Polymerase 

        3,500 U

        10,000 U/ml

        Enzymatics

        P7180L

        T7 RNA Polymerase 

        50,000 U

        50,000 U/ml

        Enzymatics

        L6060L

        Taq DNA Ligase 

        20,000 U

        40,000 U/ml

        Enzymatics

        P7110L

        Taq DSC 2.0 DNA Polymerase 

        1,250 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        P7250L

        Taq-B DNA Polymerase 

        10,000 U

        5,000 U/ml

        Enzymatics

        P7620L

        TaqIT 

        5,000 U

        50,000 U/mL

        Enzymatics

        P7070L

        Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) 

        6,000 U

        20,000 U/ml

        Enzymatics

        G5020L

        Thermolabile UDG 

        500 U

        1,000 U/ml

        Enzymatics

        Y9370L

        Thermostable Pyrophosphatase 

        1,250 U

        2,000 U/ml

        Enzymatics

        G5010L

        Uracil DNA Glycosylase 

        10,000 U

        2,000 U/ml

        Enzymatics

        P7511L

        VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase 

        500 U

        2,000 U/ml

        Enzymatics

        P7520L

        VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase 

        500 U

        2,000 U/ml

        Enzymatics

        L6030-W-L

        WGS Ligase 

        24 Reactions

        N/A

        Enzymatics

        P7640L

        ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit 

        1000 Reactions

        N/A

        Enzymatics

        P7020-HC-L

        φ29 DNA Polymerase (High Concentration) 

        2,000 U

        100,000 U/ml

        Enzymatics

        P7020-LC-L

        φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) 

        2,000 U

        10,000 U/ml

        Enzymatics

         

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        上海起發實驗試劑有限公司
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