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        當前位置:首頁 > 技術文章 > Cytoskeleton PHDG1-A說明書

        Cytoskeleton PHDG1-A說明書

        更新時間:2018-08-17      點擊次數:3060

         

        Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號轉導和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產品。我們專注于生產純化蛋白質和易于使用的試劑盒,以研究生物化學和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品CytoDYNAMIX Screens™)。

        除了我們現有的產品,我們還在產品線中為微管,微管蛋白,運動蛋白,小G蛋白效應物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務。

        Acti-stain 488 phalloidin  Acti-stain 488鬼筆環肽

         

        (Cat. # PHDG1-A)   300 Slides

        產品用途包括

        · 固定組織切片和組織培養細胞制劑中肌動蛋白絲的熒光染色。  注意:與許多肌動蛋白抗體不同,Acti-stain™488鬼筆環肽僅與F-肌動蛋白結合,導致低背景熒光。此外,通過Acti染色結合F-肌動蛋白在物種之間沒有明顯差異。

        · 體外穩定熒光肌動蛋白絲的制備。

         

        肌動蛋白染色在確定活細胞和固定細胞中細胞骨架的結構和功能方面非常有用。肌動蛋白細胞骨架在活細胞中是非常動態和不穩定的結構,但是在探測或染色肌動蛋白結構之前可以用多聚甲醛固定。 

         

        材料

        鬼筆環肽是來自蘑菇傘形毒蕈的七氨基酸肽毒素,其特異性地并且以高親和力(Kd 20nM)結合至肌動蛋白的聚合形式(F-肌動蛋白)。鬼筆環肽將肌動蛋白聚合的臨界濃度降低至小于1μg/ ml,從而充當聚合增強劑。鬼筆環肽已經用專有的綠色熒光染料標記,使其可用于染色組織培養細胞和組織切片中的肌動蛋白絲(1,參見圖1)和無細胞制劑。Acti-stain™488鬼筆環肽標記的肌動蛋白絲保留了未標記肌動蛋白的許多功能特征,包括它們與肌球蛋白相互作用的能力。Actin-stain TM 488鬼筆環肽以橙色固體形式提供。 

        注意:鬼筆環肽是有毒的,必須小心處理(LD50人= 2mg / Kg)。

         

         

        示例結果和規格

         

         

        圖1.在瑞士3T3細胞中用Acti-stain TM 488染色的肌動蛋白應力纖維。

         

        圖2. Acti-stain™鬼筆環肽的發射和激發掃描

         

         

         

         

         

         

         

        用抗 - 紐蛋白(紅色),Dapi(藍色細胞核)和F-肌動蛋白染色的Swiss 3T3細胞用Acti-stain TM 488(綠色F-肌動蛋白,Cat。#PHDG1)染色。

         

        Acti-stain TM 488的吸光度和熒光掃描。將標記的鬼筆環肽稀釋到甲醇中,并分別在350-750和500-750nm之間掃描其吸光度和激發光譜。吸光度峰值在500nm處,熒光在550nm處。

         

        Acti-stain鬼筆環肽是可用的明顯的鬼筆環肽。表1描述了它們對F-肌動蛋白的亮度,光穩定性,背景和親和力常數。將這些性能特征與其他熒光鬼筆環肽進行比較,您將看到使用Acti-stain™來滿足肌動蛋白染色要求的優勢。

        表1.熒光鬼筆環肽的生物化學特征

        共軛

        貨號

        波長(Ex / Em)

        亮度(AFU *)

        光漂白的穩定性(以秒為單位的半衰期**)

        背景 (總AFU在100nM時的百分比**)

        親和力(Kd,納摩爾)

        熒光毒傘素

        na

        485/535 FITC濾波器組

        432

        6

        22

        72 +/- 12

        Acti-stain™488

        PHDG1

        485/535 FITC濾波器組

        832

        57

        55 +/- 8

        Acti-stain™535

        PHDR1

        535/585 TRITC濾波器組

        430

        27

        12

        36 +/- 7

        Acti-stain™555

        PHDH1

        535/585 TRITC濾波器組

        551

        46

        16

        63 +/- 8

        Acti-stain™670

        PHDN1

        640/680 Cy5濾光片組

        332

        8

        18

        50 +/- 12

        * = AFU通過定量細胞成像測量。** =在沒有抗褪色的情況下在染色的Swiss 3T3細胞中測量。

         

        引用:

        oitbak等,2011。微小RNA在神經干細胞支持內皮形態發生中的作用。血管細胞v 3,p 25。

         

        Yuan et al。,2012。使用同量異位標簽對胺代謝物進行亞秒級絕dui定量,以發現哺乳動物細胞中的通路活化。肛門。化學第84頁,第2892-2899頁。

         

        問題1:我可以使用熒光標記的鬼筆環肽染色活細胞中的F-肌動蛋白嗎?

        答案1:  不幸的是,不,鬼筆環肽不能用于在活細胞中染色F-肌動蛋白。鬼筆環肽用于在固定細胞中染色F-肌動蛋白。熒光鬼筆環肽僅與F-肌動蛋白的天然四級結構結合,提供低背景。鬼筆環肽結合的正確固定條件是在PBS中的3.7%(v / v)多聚甲醛10分鐘,因為它保留了鬼筆環肽的高親和力結合所必需的季銨蛋白結構。甲醇固定破壞天然構象,因此不適合用鬼筆環肽染色F-肌動蛋白。為了監測活細胞中的肌動蛋白動力學,建議微量注射羅丹明標記的肌動蛋白(Cat。#APHR或AR05)。有關更多信息,請參閱這些數據表。

         

        問題2:哪種熒光標記的鬼筆環肽穩定/亮?

        答案2:  Acti-stains中亮和穩定的是Acti-stain 488(綠色熒光; Cat。#PHDG1)。有關我們所有Acti-stains的更多信息,請參閱下表。 

        共軛

        貓。#

        波長(Ex / EM)

        亮度(AFU)

        光漂白的穩定性*(1/2秒壽命)

        背景(總AFU在100 nM時的百分比)

        Acti-stain™488

        PHDG1

        535分之485

        832

        57

        Acti-stain™535

        PHDR1

        585分之535

        430

        27

        12

        Acti-stain™555

        PHDH1

        585分之535

        551

        46

        16

        Acti-stain™670

        PHDN1

        六百八十零分之六百四十

        332

        8

        18

        * =在沒有抗褪色的情況下測量。

         

         

        貨號

        品名

        規格

        品牌

        BK165-S

        Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK165

        Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK163-S

        Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK163

        Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK160-S

        Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK160

        Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK162-S

        Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK162

        Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK161-S

        Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK161

        Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        AAC04-Beads

        Acetyl-Lysine Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        APY03-Beads

        Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        ASM11-Beads

        SUMOylation 1 Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        ASM24-Beads

        SUMOylation 2/3 Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        UBA01-Beads

        Ubiquitination Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        CIG02-Beads

        Acetyl-Lysine Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        CIG03-Beads

        SUMO1 IP Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        CIG01-Beads

        IgG Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        CUB02-Beads

        Ubiquitination Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        BLR01

        BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

        ea

        cytoskeleton

        BLR02

        BlastR™ Rapid Filtration Kit

        ea

        cytoskeleton

        AAC02

        Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

        ea

        cytoskeleton

        AAC03

        Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

        ea

        cytoskeleton

        AAC03-HRP

        Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

        ea

        cytoskeleton

        AAC01

        Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

        ea

        cytoskeleton

        APY03

        Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

        ea

        cytoskeleton

        APY03-HRP

        Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

        ea

        cytoskeleton

        ASM01

        SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

        ea

        cytoskeleton

        ASM24

        SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

        ea

        cytoskeleton

        ASM23

        SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

        ea

        cytoskeleton

        ASM23-HRP

        SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

        ea

        cytoskeleton

        AUB01

        Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

        ea

        cytoskeleton

        AUB01-HRP

        Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

        ea

        cytoskeleton

        PHDG1

        Acti-stain 488 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDH1

        Acti-stain 555 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDN1

        Acti-stain 670 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        BK001

        Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        BK003

        Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        AKL95

        Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AD99

        Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

        ea

        cytoskeleton

        AS99

        Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKL99

        Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKF99

        Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AP05

        Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        APHR

        Actin protein (rhodamine): human platelet

        ea

        cytoskeleton

        AR05

        Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AT01

        Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        RP01P

        Arp2/3 protein complex: porcine brain

        ea

        cytoskeleton

        CS-TFC01

        Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

        ea

        cytoskeleton

        CF01

        Cofilin 1 protein: human recombinant

        ea

        cytoskeleton

        HPG6

        Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

        ea

        cytoskeleton

        MH01

        Heavy meromyosin protein

        ea

        cytoskeleton

        CS-MH03

        Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

        ea

        cytoskeleton

        CS-MYS03

        Myosin - cardiac S1 fragment

        ea

        cytoskeleton

        CS-MYS04

        Myosin - skeletal muscle S1 fragment

        ea

        cytoskeleton

        CS-MYS05

        Myosin - smooth muscle S1 fragment

        ea

        cytoskeleton

        MY02

        Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        MY03

        Myosin protein: bovine cardiac muscle

        ea

        cytoskeleton

        PR02

        Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

        ea

        cytoskeleton

        PHDR1

        Rhodamine Phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        CY-SC001

        SiR-Actin Kit

        ea

        cytoskeleton

        CY-SC013

        SiR700-Actin Kit

        ea

        cytoskeleton

        VCG03

        WASP protein VCA domain: GST tagged: human

        ea

        cytoskeleton

         

         

         

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