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        Cytoskeleton AKL95-C說明書

        更新時間:2018-08-17      點擊次數(shù):2923

         

        Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒,以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎(chǔ)研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品CytoDYNAMIX Screens™)。

        除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品,我們還在產(chǎn)品線中為微管,微管蛋白,運(yùn)動蛋白,小G蛋白效應(yīng)物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。

         

        結(jié)合蛋白質(zhì)

        · 概述

        · 關(guān)于

        · CITATIONS

        · 常見問題解答

         

        測定所有肌動蛋白結(jié)合蛋白(ABP)以確保其活性與公布的值相當(dāng)。測定因產(chǎn)品而異,包括F-肌動蛋白切斷測定,F(xiàn)-肌動蛋白激活的ATP水解和肌動蛋白聚合測定。顯示了測量WASP VCA結(jié)構(gòu)域蛋白在肌動蛋白聚合中的作用(右)。

         

        Cytoskeleton,Inc。銷售一系列純化的肌動蛋白結(jié)合蛋白。所有Cytoskeleton的肌動蛋白結(jié)合蛋白都具有高純度,并經(jīng)過嚴(yán)格的生物活性測試。細(xì)胞骨架還為肌動蛋白結(jié)合蛋白研究提供肌動蛋白,抗體和試劑盒。

         

        由Arp2 / 3和WASP VCA結(jié)構(gòu)域刺激的肌動蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3(Cat。#RP01)和WASP VCA(Cat。#VCG03)結(jié)構(gòu)域?qū)拥鞍拙酆?/span>的影響

        肌動蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用
        *,F(xiàn)-和G-肌動蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用(14)??。目前有超過150種已知的肌動蛋白結(jié)合蛋白(ABP),其占細(xì)胞蛋白的約25%。ABP在肌動蛋白細(xì)胞骨架上賦予大量功能多樣性,其涉及諸如肌肉收縮,唇形突破,細(xì)胞運(yùn)動,胞質(zhì)分裂和細(xì)胞質(zhì)流動的過程。研究這些過程如何調(diào)節(jié)肌動蛋白絲功能和動力學(xué)是一個重要且不斷增長的研究領(lǐng)域。

        可以通過使用生物化學(xué),遺傳學(xué)和免疫學(xué)方法分離和研究肌動蛋白結(jié)合蛋白。因為存在超過50種類型的肌動蛋白結(jié)合蛋白,所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的。肌動蛋白親和柱通常用于親和純化ABP,無論它們是F-或G-肌動蛋白結(jié)合。可以通過利用芘肌動蛋白熒光的聚合增強(qiáng)來進(jìn)行顯示潛在ABP影響肌動蛋白動力學(xué)的簡單測定(參見測量肌動蛋白聚合物部分)。這種性質(zhì)的研究有助于鑒定新的肌動蛋白結(jié)合蛋白。有幾篇值得一讀的關(guān)于識別和量化新肌動蛋白結(jié)合蛋白的可能方法的評論(15,16,17)?

        問題1:哪種肌動蛋白結(jié)合蛋白(ABP)可用作F-肌動蛋白結(jié)合對照? 

        答案1:肌動蛋白結(jié)合蛋白α-輔肌動蛋白(Cat。#AT01)是一種F-肌動蛋白結(jié)合和交聯(lián)蛋白,使其可用作F-肌動蛋白結(jié)合研究的對照。它的Kd是1μM,這意味著在該濃度下發(fā)生50%結(jié)合。因此,我們的目標(biāo)是使用 2μM的α-肌動蛋白作為結(jié)合測定中的陽性對照。在結(jié)合反應(yīng)中,2μM濃度的α-輔肌動蛋白相當(dāng)于0.23μg/μl。此外,α-輔肌動蛋白對pH敏感,其高親和力發(fā)生在pH 7.0。

         

        問題2:Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動蛋白活力? 

        答案2:遺憾的是,我們不會出售運(yùn)動級肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動蛋白運(yùn)動試驗。我們發(fā)現(xiàn)質(zhì)量控制測試非常難以復(fù)制,因此我們無法充分確保試劑的質(zhì)量。因此,肌球蛋白(Cat。#MY02MY03)和重型meromyosin蛋白(Cat。#MH01)不推薦用于F-肌動蛋白運(yùn)動測定。已經(jīng)測試過這些試劑的客戶在運(yùn)動方面沒有取得很好的成功,因此我們不建議購買樣品進(jìn)行測試。如果需要運(yùn)動級肌動蛋白或重型meromyosin,我們建議遵循原始方案(Kron和Spudich,1985)并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩(wěn)定性。

            參考文獻(xiàn):  SJ Kron和JA Spudich,1985年。熒光肌動蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動。PNAS,83,6272-6276。

         

        結(jié)合蛋白質(zhì)系列產(chǎn)品:

         

        PHDG1

        Acti-stain 488 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDH1

        Acti-stain 555 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDN1

        Acti-stain 670 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        BK001

        Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        BK003

        Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        AKL95

        Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AD99

        Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

        ea

        cytoskeleton

        AS99

        Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKL99

        Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKF99

        Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AP05

        Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        PHDG2

        Acti-stain 488 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDH2

        Acti-stain 555 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDN2

        Acti-stain 670 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        BK005

        Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        BK007

        Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        AKL96

        Actin protein (>96% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AD100

        Actin protein (>100% pure): bovine cardiac muscle

        ea

        cytoskeleton

        AS100

        Actin protein (>100% pure): chicken gizzard muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKL100

        Actin protein (>100% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKF100

        Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AP06

        Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        PHDG3

        Acti-stain 488 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDH3

        Acti-stain 555 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDN3

        Acti-stain 670 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        BK009

        Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        BK011

        Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        AKL97

        Actin protein (>97% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AD101

        Actin protein (>101% pure): bovine cardiac muscle

        ea

        cytoskeleton

        AS101

        Actin protein (>101% pure): chicken gizzard muscle

        ea

        cytoskeleton

         

        肌動蛋白(純度> 95%):兔骨骼肌

        Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

         

        1x1毫克(Cat。#AKL95-B)

        5x1 mg(Cat。#AKL95-C)

        產(chǎn)品用途包括

        · 肌肉肌動蛋白結(jié)合蛋白的鑒定和表征

        · 體外肌動蛋白聚合研究

        · Western印跡分析的抗體標(biāo)準(zhǔn)


        從兔骨骼肌中純化出肌動蛋白材料。 AKL99肌動蛋白純度大于99%,AKL95純度大于95%。肌肉肌動蛋白的分子量約為43kDa。兔肌肉肌動蛋白作為白色凍干粉末提供。凍干的蛋白質(zhì)在4℃下干燥至<10%濕度時保存6個月。當(dāng)再 在蒸餾水中構(gòu)成為10毫克/毫升,該蛋白質(zhì)是在以下緩沖液:5mM的的Tris-HCl pH 8.0中,0.2毫米氯化鈣2,0.2mM的ATP,5%蔗糖和1%的葡聚糖。

        純度
        通過在12%聚丙烯酰胺凝膠上掃描Coomassie Blue染色蛋白的光密度測定法測定純度。AKL99由> 99%純肌肉肌動蛋白組成,而AKL95純度> 95%(見圖1)。

         

         

         

         


        圖1:圖1.兔骨骼肌肌動蛋白的純度。在SDS-PAGE凝膠上運(yùn)行100μg> 99%純(AKL99)和> 95%純(AKL95)兔骨骼肌肌動蛋白,并用考馬斯藍(lán)染色。箭頭表示肌動蛋白,箭頭表示α-肌動蛋白污染物(115kDa)。純化的肌動蛋白中的微量雜質(zhì)主要是肌動蛋白結(jié)合蛋白,例如α-肌動蛋白和凝溶膠蛋白。

         

        生物活性
        肌肉肌動蛋白的生物活性由其在體外有效聚合成長絲(F-肌動蛋白)的能力和在旋轉(zhuǎn)分析中與未聚合組分分離的能力決定。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保AKL99產(chǎn)生> 90%的F-肌動蛋白,AKL95在該測定中產(chǎn)生> 80%的F-肌動蛋白。

         

        問題1:儲存肌動蛋白的*方法是什么,以確保大的穩(wěn)定性和保質(zhì)期?

        答案1:   細(xì)胞骨架提供我們所有的肌動蛋白作為凍干粉末,以便它們可以在室溫下運(yùn)輸。收到后,凍干粉末應(yīng)在4℃下儲存在帶有干燥劑的密封容器中。重要的是監(jiān)測干燥劑的新鮮度并確保其繼續(xù)吸收水分以保護(hù)凍干的肌動蛋白。妥善儲存后,凍干肌動蛋白保證自購買之日起6個月內(nèi)保持穩(wěn)定。或者,肌動蛋白可立即以推薦的濃度重新懸浮,等分,在液氮中快速冷凍并儲存在-70℃。冷凍的等分試樣可穩(wěn)定6個月。解凍冷凍等分試樣時,重要的是在室溫水浴中解凍。

         

        問題2:聚合后儲存F-肌動蛋白的*方法是什么?

        答案2:   G-肌動蛋白在4°C下穩(wěn)定2天,需要二價陽離子,pH 6.5 - 8.0和ATP穩(wěn)定性。F-肌動蛋白是穩(wěn)定的,可以在4°C下儲存1-2周。F-肌動蛋白需要ATP(0.2mM)和Mg2 +(2mM)的穩(wěn)定性,并且在pH6.5和pH8.5以下是不穩(wěn)定的。F-肌動蛋白對冷凍不穩(wěn)定。F-肌動蛋白可以轉(zhuǎn)移到各種緩沖液(例如HEPES,磷酸鹽等)而沒有不利影響。我們建議在4°C下儲存F-肌動蛋白時,添加抗菌劑,如100μg/ ml氨芐青霉素和10μg/ ml氯霉素。

         

        Mohammad等,2012。Flightless I是一種粘附相關(guān)的肌動蛋白加帽蛋白,可調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移。FASEB?。doi:10.1096 / fj.11-202051。

        Reay等,2012。核因子κB抑制對血清型9腺相關(guān)病毒(AAV9)微小肌營養(yǎng)不良蛋白基因轉(zhuǎn)移至mdx小鼠的影響。摩爾。醫(yī)學(xué)。v 18 pp 466-476。

        Windhorst等,2011。肌醇-1,4,5-三磷酸-3-激酶-A對惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞運(yùn)動的功能作用。詮釋。J.癌癥。第129卷,第1300-1309頁。

        Arora等,2004。凝溶膠蛋白通過rac依賴性步驟介導(dǎo)膠原蛋白吞噬作用。摩爾。生物學(xué)。細(xì)胞。第15卷,第588-599頁。

        Ishikawa等,2004。來自低溫電子顯微鏡的棘阿米巴肌球蛋白IC尾的子域組織。PROC。國家科。科學(xué)院。科學(xué)。美國。第101卷,第12189-12194頁。

        Balcer等,2003。通過高分子量Srv2 / CAP復(fù)合物,cofilin,profilin和Aip1協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)肌動蛋白絲轉(zhuǎn)換。CURR。生物。第13卷,第2159-2169頁。

        Loomis等,2003.Espin交聯(lián)導(dǎo)致體內(nèi)微絨毛型平行肌動蛋白束的延長。J. Cell Biol。第163卷,第1045-1055頁。

        Upadhyaya等,2003。通過使用肌動蛋白推進(jìn)的脂質(zhì)囊泡探測聚合力。PROC。國家科。科學(xué)院。科學(xué)。美國。第100卷,第4521-4526頁。

        Humphries等,2002。通過肌動蛋白結(jié)合蛋白冠狀蛋白直接調(diào)節(jié)Arp2 / 3復(fù)合物的活性和功能。J. Cell Biol。第159卷,第993-1004頁。

        Sagot等,2002。由Bni1和profilin介導(dǎo)的肌動蛋白成核機(jī)制。納特。細(xì)胞生物學(xué)。第4卷,第626-631頁。

        Engqvist-Goldstein等,2001。肌動蛋白結(jié)合蛋白Hip1R在胞吞作用的早期階段與網(wǎng)格蛋白結(jié)合并在體外促進(jìn)網(wǎng)格蛋白裝配。J. Cell Biol。第154號,第1209-1223頁。

         

         

        貨號

        品名

        規(guī)格

        品牌

        BK165-S

        Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK165

        Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK163-S

        Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK163

        Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK160-S

        Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK160

        Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK162-S

        Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK162

        Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        BK161-S

        Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

        (10 assay)

        cytoskeleton

        BK161

        Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

        (30 assay)

        cytoskeleton

        AAC04-Beads

        Acetyl-Lysine Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        APY03-Beads

        Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        ASM11-Beads

        SUMOylation 1 Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        ASM24-Beads

        SUMOylation 2/3 Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        UBA01-Beads

        Ubiquitination Affinity Beads

        ea

        cytoskeleton

        CIG02-Beads

        Acetyl-Lysine Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        CIG03-Beads

        SUMO1 IP Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        CIG01-Beads

        IgG Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        CUB02-Beads

        Ubiquitination Control Beads

        ea

        cytoskeleton

        BLR01

        BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

        ea

        cytoskeleton

        BLR02

        BlastR™ Rapid Filtration Kit

        ea

        cytoskeleton

        AAC02

        Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

        ea

        cytoskeleton

        AAC03

        Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

        ea

        cytoskeleton

        AAC03-HRP

        Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

        ea

        cytoskeleton

        AAC01

        Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

        ea

        cytoskeleton

        APY03

        Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

        ea

        cytoskeleton

        APY03-HRP

        Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

        ea

        cytoskeleton

        ASM01

        SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

        ea

        cytoskeleton

        ASM24

        SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

        ea

        cytoskeleton

        ASM23

        SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

        ea

        cytoskeleton

        ASM23-HRP

        SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

        ea

        cytoskeleton

        AUB01

        Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

        ea

        cytoskeleton

        AUB01-HRP

        Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

        ea

        cytoskeleton

        PHDG1

        Acti-stain 488 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDH1

        Acti-stain 555 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        PHDN1

        Acti-stain 670 phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        BK001

        Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        BK003

        Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

        ea

        cytoskeleton

        AKL95

        Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AD99

        Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

        ea

        cytoskeleton

        AS99

        Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKL99

        Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AKF99

        Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AP05

        Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        APHR

        Actin protein (rhodamine): human platelet

        ea

        cytoskeleton

        AR05

        Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        AT01

        Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        RP01P

        Arp2/3 protein complex: porcine brain

        ea

        cytoskeleton

        CS-TFC01

        Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

        ea

        cytoskeleton

        CF01

        Cofilin 1 protein: human recombinant

        ea

        cytoskeleton

        HPG6

        Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

        ea

        cytoskeleton

        MH01

        Heavy meromyosin protein

        ea

        cytoskeleton

        CS-MH03

        Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

        ea

        cytoskeleton

        CS-MYS03

        Myosin - cardiac S1 fragment

        ea

        cytoskeleton

        CS-MYS04

        Myosin - skeletal muscle S1 fragment

        ea

        cytoskeleton

        CS-MYS05

        Myosin - smooth muscle S1 fragment

        ea

        cytoskeleton

        MY02

        Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

        ea

        cytoskeleton

        MY03

        Myosin protein: bovine cardiac muscle

        ea

        cytoskeleton

        PR02

        Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

        ea

        cytoskeleton

        PHDR1

        Rhodamine Phalloidin

        ea

        cytoskeleton

        CY-SC001

        SiR-Actin Kit

        ea

        cytoskeleton

        CY-SC013

        SiR700-Actin Kit

        ea

        cytoskeleton

        VCG03

        WASP protein VCA domain: GST tagged: human

        ea

        cytoskeleton

         

         

         

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