kamiyabiomedical KT-12247說(shuō)明書(shū)

kamiyabiomedical KT-12247說(shuō)明書(shū)

Rat Creatine Kinase MB Isoenzyme (CKMB) ELISA

大鼠肌酸激酶同工酶（CKMB）ELISA
貨號(hào)：KT-12247

預(yù)期用途
該試劑盒是一種用于大鼠CKMB體外定量測(cè)定的夾心酶免疫分析方法
血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體。為了
僅供研究使用。

COMPONENTS

Reagents Quantity

Pre-coated, ready to use 96-well strip plate 1

Calibrator 2

Calibrator Diluent 1 × 20 mL

Detection Reagent A 1 × 120 μL

Detection Reagent B 1 × 120 μL

Assay Diluent A 1 × 12 mL

Assay Diluent B 1 × 12 mL

TMB Substrate 1 × 9 mL

Stop Solution 1 × 6 mL

Wash Buffer (30X concentrate) 1 × 20 mL

Plate sealer for 96 wells 4

需要但未提供的材料
一。帶450±10納米濾光片的微孔板閱讀器。
2。單通道或多通道移液管，具有高精度和一次性。
3。微離心管。
4。去離子水或蒸餾水。
5。吸墨紙吸墨紙吸墨紙。
6。洗滌液容器。
7。0.01 mol/L（或1x）磷酸鹽緩沖鹽（PBS），pH值7.0-7.2。

儲(chǔ)存
所有試劑應(yīng)按小瓶上的標(biāo)簽保存。校準(zhǔn)器，檢測(cè)試劑A，
檢測(cè)試劑B和96孔板條板在收到后應(yīng)存放在-20℃下，其他試劑應(yīng)存放在-20℃下
應(yīng)為4°C。未使用的板條應(yīng)保存在密封袋中，并提供干燥劑
盡量減少暴露在潮濕空氣中。打開(kāi)的測(cè)試包將保持穩(wěn)定1個(gè)月，前提是它存儲(chǔ)為
如上所述。

試驗(yàn)原理
本試劑盒中提供的微孔板已預(yù)涂有CKMB特異性抗體。然后將校準(zhǔn)品或樣品添加到適當(dāng)?shù)奈⒖装迳希⒖装迳嫌幸环N針對(duì)CKMB的生物素結(jié)合抗體。接著，將親和素與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合后，加入到每個(gè)微孔板中并孵育。加入TMB底物溶液后，只有含有CKMB、生物素結(jié)合抗體和酶結(jié)合親和素的微孔才會(huì)出現(xiàn)顏色變化。加入硫酸溶液終止酶-底物反應(yīng)，并測(cè)量顏色變化
在450 nm±10 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行分光光度測(cè)定。然后通過(guò)比較樣品的外徑和校準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)確定樣品中CKMB的濃度。
樣品收集和儲(chǔ)存
血清
使用血清分離管，使樣品在室溫下凝結(jié)2小時(shí)，或在4℃下凝結(jié)過(guò)夜，然后在約1000×g的條件下離心20分鐘。立即對(duì)新制備的血清進(jìn)行分析，或在-20℃或-80℃下將樣品分批儲(chǔ)存，以備日后使用。避免反復(fù)凍融
循環(huán)。

等離子體
用EDTA或肝素作為抗凝劑收集血漿。在收集后30分鐘內(nèi)，將樣品在1000 x g、4°C下離心15分鐘。立即取出血漿并進(jìn)行分析，或在-20°C或-80°C下將樣品分批儲(chǔ)存，以備日后使用。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
組織勻漿
組織勻漿的制備取決于組織類(lèi)型。
一。組織在冰凍PBS中沖洗以*去除多余的血液，并在均質(zhì)前稱(chēng)重。
2。將組織切成小塊，在新鮮的裂解緩沖液（根據(jù)目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞位置需要選擇不同的裂解緩沖液）（w:v=1:20-1:50，例如在20-50毫克的組織樣品中加入1毫升裂解緩沖液）中用玻璃均質(zhì)機(jī)在冰上均質(zhì)（微型組織研磨機(jī)也可以）。
三。所得懸浮液用超聲波細(xì)胞破膠劑進(jìn)行超聲處理，直到溶液澄清。
四。然后，將勻漿在10000×g下離心5分鐘，收集上清液，立即或等分測(cè)定，并在≤-20℃下保存。
細(xì)胞裂解物在按照以下說(shuō)明進(jìn)行分析之前，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解。
一。貼壁細(xì)胞用冷PBS輕輕洗滌，用胰蛋白酶分離，1000×g離心5分鐘（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）。
2。在冷PBS中清洗細(xì)胞三次。
三。在濃度為107個(gè)/mL的新鮮溶解緩沖液中重新培養(yǎng)細(xì)胞，如有必要，可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行超聲波處理，直至溶液澄清。
四。在1500 x g下，在4°C下離心10分鐘，以去除細(xì)胞碎片。立即測(cè)定或等分，并儲(chǔ)存在≤-20°C下。
細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體
在1000 x g下離心樣品20分鐘。收集上清液并立即進(jìn)行分析，或在-20°C或-80°C下分批儲(chǔ)存樣品以備日后使用。避免重復(fù)凍融循環(huán)。