澳大利亞Biosensis公司Fluoro-Jade C (FJC) 退化神經(jīng)元染色試劑盒介紹

一、基礎(chǔ)信息  

1. 產(chǎn)品貨號(hào)與名稱  

  - 貨號(hào)：TR-100-FJT、TR-100-FJ

  - 英文名稱：Fluoro-Jade C (FJC) Ready-to-Dilute Staining Kit for identifying Degenerating Neurons  

  - 中文名稱：Fluoro-Jade C (FJC) 退化神經(jīng)元染色試劑盒

2. 規(guī)格與品牌  

  - 規(guī)格：20 mL、40mL

  - 品牌：Biosensis

二、核心原理  

1. Fluoro-Jade C 的化學(xué)特性  

  Fluoro-Jade C（FJC）是一種陰離子熒光素衍生物，通過特殊化學(xué)修飾增強(qiáng)了與變性神經(jīng)元的親和力。其分子結(jié)構(gòu)包含多個(gè)羧基基團(tuán)，使其在生理?xiàng)l件下帶負(fù)電荷，能夠特異性結(jié)合變性神經(jīng)元膜表面暴露的酸性磷脂和變性蛋白質(zhì)（如磷酸化神經(jīng)絲）。  

2. 染色機(jī)制  

  - 變性神經(jīng)元識(shí)別：當(dāng)神經(jīng)元發(fā)生退行性變時(shí)，細(xì)胞膜通透性增加，酸性成分暴露。FJC通過靜電相互作用和疏水效應(yīng)結(jié)合這些成分，形成穩(wěn)定的熒光標(biāo)記。  

  - 高分辨率成像：FJC的激發(fā)峰為495 nm，發(fā)射峰為521 nm，與FITC濾光片兼容，可清晰顯示退化神經(jīng)元的胞體、樹突、軸突及末端形態(tài)，分辨率顯著優(yōu)于傳統(tǒng)銀染和早期Fluoro-Jade染料（如FJ、FJB）。  

  - 抗褪色性能：FJC分子結(jié)構(gòu)中的剛性平面設(shè)計(jì)使其具有優(yōu)異的抗光漂白能力，染色結(jié)果可長期保存（4℃避光保存數(shù)周），適合高分辨率共聚焦顯微鏡成像。  

三、解決實(shí)驗(yàn)中的關(guān)鍵問題  

1. 傳統(tǒng)方法的局限性  

  - 銀染技術(shù)：操作繁瑣、耗時(shí)（需2-3天），且無法與免疫熒光標(biāo)記兼容，難以實(shí)現(xiàn)多重染色。  

  - TUNEL法：僅檢測(cè)DNA斷裂，無法顯示神經(jīng)元整體形態(tài)，且對(duì)早期變性神經(jīng)元不敏感。  

  - 硫黃素S等染料：特異性差，易與淀粉樣斑塊非特異性結(jié)合，背景干擾嚴(yán)重。  

2. FJC染色的突破性解決方案  

  - 全階段變性神經(jīng)元檢測(cè)：可同時(shí)標(biāo)記凋亡、壞死和自噬性死亡的神經(jīng)元，覆蓋從早期胞體腫脹到晚期軸突斷裂的完整退變過程。  

  - 形態(tài)學(xué)與功能學(xué)結(jié)合：在顯示神經(jīng)元退變的同時(shí)，可與NeuN、TH等抗體進(jìn)行多重染色，明確退變神經(jīng)元的類型和功能狀態(tài)。  

  - 多組織兼容性：適用于新鮮冷凍、多聚甲醛/福爾馬林固定及石蠟包埋組織，無需復(fù)雜預(yù)處理即可獲得高質(zhì)量染色結(jié)果。  

四、技術(shù)優(yōu)勢(shì)  

1. 即用型設(shè)計(jì)，簡化實(shí)驗(yàn)流程  

  - 試劑盒包含F(xiàn)JC染色液、DAPI復(fù)染液、*和KMnO?，無需自行配制，直接使用。  

  - 標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟：組織切片經(jīng)固定、通透化后，只需依次浸入KMnO?（消除背景）、FJC染色液（30分鐘）和DAPI（5分鐘），全程可在2小時(shí)內(nèi)完成。  

2. 高靈敏度與特異性  

  - 信噪比優(yōu)勢(shì)：FJC的信號(hào)背景比顯著高于FJB和硫黃素S，在低倍鏡下即可清晰觀察退變神經(jīng)元的分布，尤其適合大樣本定量分析。  

  - 非特異性染色控制：通過KMnO?預(yù)處理消除組織內(nèi)自發(fā)熒光，結(jié)合DAPI復(fù)染細(xì)胞核，可有效區(qū)分神經(jīng)元與血管、膠質(zhì)細(xì)胞等非特異性染色。  

3. 兼容性與靈活性  

  - 多重?zé)晒鈽?biāo)記：FJC的激發(fā)/發(fā)射光譜與Alexa Fluor 488、Cy3等常用熒光素?zé)o重疊，可與β-淀粉樣蛋白（Aβ）、磷酸化tau蛋白等抗體聯(lián)合使用，實(shí)現(xiàn)退變神經(jīng)元與病理標(biāo)志物的共定位分析。  

  - 跨物種應(yīng)用：已在小鼠、大鼠、猴及人類腦組織中驗(yàn)證，適用于多種神經(jīng)退行性疾病模型（如5×FAD轉(zhuǎn)基因小鼠、MPTP誘導(dǎo)的PD模型）。  

4. 抗干擾與穩(wěn)定性  

  - 抗組織處理干擾：對(duì)福爾馬林固定、石蠟包埋等劇烈處理具有耐受性，染色結(jié)果重復(fù)性高。  

  - 長期保存性能：未開封試劑盒可在4℃穩(wěn)定保存12個(gè)月，稀釋后的染色液需在4小時(shí)內(nèi)使用以確保最佳效果。  

五、應(yīng)用場景與客戶群體  

1. 核心應(yīng)用領(lǐng)域  

  - 神經(jīng)退行性疾病研究：  

    - 阿爾茨海默?。ˋD）：檢測(cè)Aβ斑塊周圍的退變神經(jīng)元，研究突觸丟失與認(rèn)知功能的關(guān)系。  

    - 帕金森?。≒D）：在MPTP誘導(dǎo)的小鼠模型中，定位黑質(zhì)致密部（SNc）多巴胺能神經(jīng)元的退變過程。  

    - 肌側(cè)索硬化（ALS）：分析脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的軸突退變與膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)。  

  - 神經(jīng)損傷與修復(fù)研究：  

    - 腦缺血模型：檢測(cè)缺血半暗帶神經(jīng)元的退變動(dòng)態(tài)，評(píng)估溶栓治療效果。  

    - 脊髓損傷模型：追蹤軸突再生過程中退變軸突的清除效率。  

  - 藥物研發(fā)與毒性評(píng)估：  

    - 神經(jīng)保護(hù)藥物篩選：在細(xì)胞或動(dòng)物模型中驗(yàn)證候選藥物對(duì)退變神經(jīng)元的保護(hù)作用。  

    - 神經(jīng)毒性評(píng)價(jià)：評(píng)估藥物、重金屬等對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷機(jī)制。  

2. 目標(biāo)客戶群體  

  - 科研機(jī)構(gòu)與高校：神經(jīng)科學(xué)、病理學(xué)、藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，用于基礎(chǔ)機(jī)制研究和論文發(fā)表。  

  - 生物醫(yī)藥企業(yè)：藥物研發(fā)部門，用于神經(jīng)退行性疾病藥物的臨床前模型驗(yàn)證。  

  - CRO公司：提供外包染色服務(wù)，支持藥物毒理學(xué)評(píng)價(jià)和病理分析。  

六、訂貨信息  

1. 中國代理商：上海起發(fā)

2. 注意事項(xiàng)  

  - 價(jià)格咨詢：產(chǎn)品價(jià)格需通過代理商獲取，根據(jù)訂購量可享批量折扣。  

  - 運(yùn)輸與保存：試劑盒需4℃避光保存，運(yùn)輸過程中使用冰袋確保穩(wěn)定性。  

  - 實(shí)驗(yàn)建議：  

    - 組織切片需充分固定（多聚甲醛或福爾馬林），避免非特異性染色。  

    - 染色后切片應(yīng)避免長時(shí)間暴露于強(qiáng)光下，建議使用抗褪色封片劑（如含DAPI的SlowFade Gold）。  

    - 新鮮稀釋的FJC染色液好用，剩余溶液可冷藏避光保存48小時(shí)，但需在使用前過濾以去除沉淀。  

七、技術(shù)驗(yàn)證與典型案例  

1. 實(shí)驗(yàn)流程驗(yàn)證  

  - 組織處理：取MPTP誘導(dǎo)的PD小鼠中腦切片，經(jīng)4%多聚甲醛固定后，依次用KMnO?（0.01%）處理5分鐘、FJC染色液孵育30分鐘、DAPI復(fù)染5分鐘，封片后在熒光顯微鏡下觀察。  

  - 結(jié)果顯示：黑質(zhì)致密部（SNc）可見大量FJC陽性神經(jīng)元，胞體皺縮、樹突斷裂，與TH免疫熒光染色結(jié)果共定位，證實(shí)退變神經(jīng)元為多巴胺能神經(jīng)元。  

2. 多重染色應(yīng)用  

  - 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：在5×FAD轉(zhuǎn)基因小鼠腦切片中，同時(shí)進(jìn)行FJC染色和Aβ免疫熒光標(biāo)記（Alexa Fluor 594偶聯(lián)抗體）。  

  - 結(jié)果顯示：FJC陽性神經(jīng)元環(huán)繞Aβ斑塊分布，提示斑塊周圍神經(jīng)元退變與Aβ沉積密切相關(guān)。  

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