Receptor Ligand Technologies GmbH代理

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描述: 內皮細胞生長因子（ECGF）是一種從牛大腦中提取出來的，含有能夠促進哺乳動物血管內皮細胞生長的因子。 也有報道稱ECGF對用于單克隆抗體生產的雜交瘤細胞的融合和生長有一定的輔助作用。制備內皮細胞生長因子的方法是根據Maciag等的方法（1979）修改過的，是從含有氯化鈉和硫酸鏈霉素的溶液中無菌凍干而來的。
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）可以用傳統的方法進行原代培養。這些細胞的持續增殖已被證明是非常困難的。牛腦中的提取物可以保證這些細胞的長期體外增殖。在細胞培養系統中加入纖維連接蛋白或膠原基質可以培養內皮細胞。當加入ECGF后，在細胞培養液中加入胎牛血清的量可以減少。肝素可以提高ECGF有絲分裂的活性。 有報道稱在培養雜交瘤和其他類型的細胞時，加入ECGF后可以不用加入飼養層細胞。 
宿主: 牛
純化: 粗提物
緩沖液: H₂O, w/o 防腐劑
形式: 凍干粉 
使用說明:內皮細胞生長因子是經過無菌凍干的，每小瓶含6毫克蛋白。原液的配制：用2毫升預熱（37℃）的滅菌平衡鹽溶液溶解蛋白，溫和旋轉小瓶使干粉溶解。原液可進一步用無菌組織培養液稀釋到所需的工作濃度。雖然原液可加入無菌組織培養液中，建議將稀釋的蛋白無菌過濾后使用。6毫克ECGF可以加入 500毫升的培養基中。 
生物活性/工作濃度: 培養人臍靜脈內皮細胞（HUVEC），ECGFzui適宜的工作濃度是50-200 μg/ml。 加入50 μg/ml肝素后，ECGFzui適宜濃度是10 μg/ml. 作為制備單克隆抗體的輔助生長因子，ECGF的zui適宜濃度是25- 100 μg/ml. 
種屬的特異性: 牛ECGF 可以作用于牛，鼠和人的細胞。 
保存條件：
溶解之前保存 2-8 °C。 溶解之后，溶液保存在 –20 °C。
推薦將溶解后溶液保存在 -20°C。避免反復凍融。 
使用: 牛ECGF 只用于科研，不能應用于臨床! 
產品編號: 300-090-5 規格: 5x 6 mg 
參考文獻: [Maciag T (1982) JBC 257:5333; Olander J (1980) In Vitro 6:209; Folkman J (1980) Nature 288:551; Evans CH (1982) JNCI 68:127; Pintus C (1983) J Immuno Meth 61:195; Maciag T (1979) PNAS 6:5674; Thornton SC (1983) Science 222:623; Ransom JH (1986) Methods Enzymol 121:293]
ECGF 用于HUVEC細胞培養

ECGF用于人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的zui適濃度范圍是100-300 μg/ml，加入肝素(50 μg/ml)后的zui適濃度范圍是10-20 μg/ml。作為一種生長添加物用于單克隆抗體的生產，zui適濃度范圍是25-100 μg/ml。牛和豬ECGF因子對小鼠細胞，牛細胞和人細胞起作用。

Protocol:
- 每孔中生長培養基(EGM)中的細胞濃度是5-7 x 10³ cells
- 隔天培養細胞[如果實驗很急,可以將早上培養的細胞下午進行換液。將生長培養基換成基礎培養基（EBM）]
- 將生長培養基換成基礎培養基(HUVEC: 基礎培養基 +1-2% 胎牛血清)
- 培養24h
- 再次換液，加入因子 (生長因子，抑制劑，等等)
- 培養18h
- 加入10u l 3H-胸腺嘧啶溶液[0.025mCi/ml]/孔 (=0.25u Ci)
- 37°C再培養6h
- 洗滌步驟：(250ul/孔)
       PBS        一次
       MeOH     兩次，每次5min
       TCA        兩次，每次10min
       H₂O        一次
- 每孔加入250 ul 0.3M NaOH，裂解細胞
- 將2.5 ml ECO加入到相應的閃爍計數瓶中
- 將細胞裂解液加入的閃爍計數瓶中
- 用閃爍液體計數（-計數器;貝克曼儀器公司） 

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